Elucidação da epidemiologia da tuberculose bovina pela análise do número variável de repetições nucleotídicas em tandem em múltiplos loci do genoma de micobactérias patogénicas

A técnica de análise do número variável de repetições nucleotídicas em tandem em múltiplos loci (MLVA-VNTR) tem sido utilizada para caracterizar geneticamente microrganismos, nomeadamente bactérias patogénicas, como é o caso de Mycobacterium bovis, o principal agente etiológico da tuberculose bovina. Neste capítulo, descreve-se um protocolo de MLVA-VNTR aplicado à genotipagem de estirpes do complexo Mycobacterium tuberculosis (MTBC) e, por isso, designado MIRU-VNTR (mycobacterial interspersed repetitive units-VNTR), usando como modelo a espécie M. bovis. A metodologia subjacente, baseada na análise de um painel de oito loci, consiste em determinar, por eletroforese em gel horizontal de agarose, o tamanho dos fragmentos de DNA amplificados por reação de polimerase em cadeia (PCR) que contêm as regiões VNTR de interesse, possibilitando a estimativa do número de cópias das repetições presentes e que correspondem a variantes alélicas nesses loci.